Pamela Isley grandit dans une riche famille distante. À l'université, elle étudia la botanique et la biochimie avancée. Un de ces professeurs, Dr Jason Woodrue , connu sous le nom de Alec Holland, l'aurait séduite et aurait commencé à faire des expériences sur elle: il lui injecta poisons et des toxines. Ces expériences causèrent à Isley une transformation chimique et physique; elle faillti mourir à deux reprises à cause de ces poisons qui lui furent injectés. Ces expériences aurait aussi fini par lui faire perdre la raison. Elle se mit alors à traiter les plantes comme ses propres enfants. Pendant ce temps, Woodrue échappa aux autorités, laissant Pamela à l'hôpital pendant six mois. Enragée par la trahison et l'abandon de Woodrue, la jeune femme souffrit psychologiquement : elle subit des sautes d'humeur: tantôt douce et gentille, tantôt violente et cruelle. Elle fini par quitter l'école et Seattle pour se retrouver à Gotham City . L'année de la première apparition de Batman, l'Empoisonneuse prit la ville en otage en menaçant de libérer un poison dans l'air de la ville si une rançon ne lui était pas versée. Elle fut arrêtée par Batman et enfermée dans l'asile d'Arkham. Dès lors, elle devient obsédée par l'homme-chauve-souris, seul être qu'elle ne pu contrôler ou influencer. 
